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ColProof細胞和組織RNA快速提取試劑盒產(chǎn)品介紹
更新時間:2023-07-05   點擊次數(shù):777次

Col-R0101 試劑盒應用 本試劑盒采用裂解液配方在 10 分鐘內完成細胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無需使用蛋白酶 K、無需低溫離心,無需使用有機試劑。該配方中含有 RNA 保護劑,能夠抑制RNA降解、保護RNA 完整,從而提高 RNA 產(chǎn)量。提取 RNA 可用于 RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫構建等。 本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領域。


保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、無 DNase 無 RNase 離心管、DNase I(2U/μL,或貨號QR0102)使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動物組織中提取 RNA

1.1.1 取 20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨后,加入 700μL 裂解液 C,顛倒混勻?;蛘呷?20-100mg 樣本加入 700μL 裂解液 C,加入 1 顆鋼珠,放入組織研磨器中,研磨1-2 分鐘。備注:不同樣本中 RNA 含量差異很大,過多使用樣本容易導致堵塞,最終導致RNA提取量下降。

1.1.2 55℃孵育 1 分鐘。

1.1.3 12,000rpm 離心 1 分鐘,取 500μL 上清。

1.1.4 加入 250μL 無水乙醇,充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.2 從懸浮細胞中提取 RNA

1.2.1 細胞 1,000rpm 離心 5 分鐘,收集細胞沉淀。

1.2.2 細胞數(shù)量為<5x106個時,加入 500uL 解液 C。細胞數(shù)量為 5x106~1x107個時,加入 700uL 裂解液 C。輕輕吹打混勻。55C孵育 1分鐘。

1.2.3 12.000rpm 離心1 分鐘。

1.2.4 細胞數(shù)量為 5×10 6個時,取 450μL 上清。細胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個時,取650μL 上清。

1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇,充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.3 從貼壁細胞中提取 RNA

1.3.1 胰酶消化細胞后 1,000rpm 離心 5 分鐘,收集細胞沉淀。

1.3.2 細胞數(shù)量為<5×10 1="" 10="" l="" 1.3.3="" 000rpm="" 1.2.4=""><5×10 10="" l="" 1.2.5="" 0.5="" 2.1-2.7="">為<5×10 6個時,取 450μL 上清。細胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個時,取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇,充分混勻。按照步驟 2.1-2.7 操作。

2. RNA 純化

2.1 全部加入 RNA 吸附柱中,12,000rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW1,12,000rpm 離心 30 秒,倒掉收集管中廢液。

2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW2,12,000rpm 離心 30 秒,倒掉收集管中廢液。


2.4 重復步驟 2.3 一次。

2.5 12,000rpm 離心 2 分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.6 將 RNA 吸附柱放入無 DNase 無 RNase 離心管中,加入 30-50μL 洗脫液C,室溫放置1 分鐘。

2.7 12,000rpm 離心 2 分鐘,得到 RNA 溶液,-80℃保存。

注意事項

1. 務必在超凈臺中進行操作,常換手套,防止 RNA 降解。

2. 盡可能使用新鮮樣本進行 RNA 提取。

3. 使用無 DNase 無 RNase 的吸頭和離心管,防止 RNA 降解,常更換吸頭,防止交叉污染。

4. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液 C 置于 65℃水浴后再使用。

5. 根據(jù)后續(xù)試驗需求,請使用 DNase I(貨號 QR0102)進行基因組清除。





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